Polymerase Chain Reaction
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PCR(Polymerase Chain Reaction)是利用耐热性DNA聚合酶,分析特定基因或者以转基因(Genetic Engineering)可能的水平扩增的方法。
通过稳定cycling,具有属于扩增部位两端的碱基序列的primer对与扩增对象DNA结合、聚合、重复回落过程,将特定部位的DNA几何级数般合成的过程。

1. Multiplex PCR
Multiplex PCR是同时使用多个primer对,将多个靶基因在相同的反应液中扩增的方法。该情况计算Primer的相互作用,primer形成dimer或者相互之间互不干扰,扩增的产物区别各自的大小,应在agarose gel上可以区分。
Multiplex PCR
Multiplex PCR在同样的试料,存在检测可能的多数基因的情况可有效使用,通过一次检查就可判别多数病菌以及基因型,大大减少了时间和费用。通过一次检查就可以检测出性传播病原体的STD诊断工具,使用于是否感染HPV以及判别基因型,是否感染结核杆菌与判别耐药性。此外,利用STR标记,适用于法医学、亲自鉴定等。

技术用途 : PCR kit

2. Real-time PCR
Real time PCR是PCR过程中将扩增的DNA产物实时监测的试验技术,可以正确定量,不仅解析基因表现的定量分析,还活用于诊断病原体感染的定性分析。Real Time PCR扩增产物利用荧光进行检测,SYBR Green系列的荧光物质与TaqMan Probe为代表使用着。SYBR Green荧光结合DNA双螺旋,由于是显示荧光物质,因此成本低为优点,但对非特异性扩增产物也产生反应为缺点。为了克服该问题,扩增结束后,对扩增的DNA产物测量melting curve,从而判别非特异性是否扩增。
Real-time PCR
利用TaqMan probe的Real time PCR是为了扩增PCR的一对primer以外, 位于扩增对象部位中间的TaqMan probe被追加要求。TaqMan Probe的5'end是荧光物质,3'end与吸收荧光的Quencher结合,Annealing过程中,依据Quencher表现的荧光被吸收,接下来的Extension过程,因DNA polymerase的5’→3’exonuclease作用,贴于5'的荧光物质probe掉落并表现荧光。测量该荧光量,就可以测量target基因的扩增量。利用TaqMan probe的方法,相比使用SYBR Green荧光物质,反应特异性(specificity)高,因此广泛用于诊断。

技术用途 : PCR kit

3. ASO PCR
ASO (Allele Specific Oligonucleotide) PCR是可以确认DNA碱基序列上的遗传变异的PCR技术。根据对立基因的碱基序列,对每个变异的碱基,利用可以特别结合的primer,以PCR可以分析有无变异。使用于ASO PCR的Primer情况,3'末端的一个碱基制作成可以与每个Allele特别结合,根据有无变异决定DNA是否扩增,通过PCR扩增产物的有无生成,可以判别基因变异的种类。
ASO PCR
通过ASO PCR方法,可以执行的代表实验是SNP(Single Nucleotide Polymorphism)的分析。SNP是指细胞核中染色体持有的30亿个碱基序列中,显示个体偏差的一个或者数十个碱基变异。人类99.9%的基因是一致的,但由于0.1%的SNP差异,导致个子以及肤色有所不同。韩国人相比西方人,容易得胃癌和肝癌的起因,也是由于这种差异。SNP做蛋白质部分的情况,会做出错误的蛋白质,从而引起致命的疾病,血友病也是因为单个碱基变异引起的。

技术用途 : PCR kit

4. Methylation Specific PCR (MSP)
Human DNA是CpG碱基序列的Cytosine,可以成为methylation,通过它可以调节基因表现。特别是基因表现调节部位的promoter区,多数存在CpG dinucleotide,存在CpG island,正常表现的基因CpG island区时没有methylation。Hypermethlyation或者hypomethylation是因tumor suppressor gene的抑制或者oncogene的表现等,成为诱发癌症的原因。根据是否Methlylation,通过决定特定碱基序列的PCR是否扩增的Methylation Specific PCR (MSP)方法,可以检查特定基因依据methylation的癌症诱发因子。
Methylation Specific PCR (MSP)
当处理Methylated DNA에 bisulfite,不会成为methylation的cytosine,变更为uracil。利用该特点,通过PCR确认碱基序列部位是否methylation。考虑成为Methylation情况,生产PCR primer,成为methylation情况,PCR会扩增;假定没有成为methylation,生产PCR primer,没有成为methylation情况,PCR不会扩增。

技术用途 : PCR kit